【實(shí)驗(yàn)用品】

材料：貼壁培養(yǎng)的ATCC細(xì)胞

器材：離心機(jī)、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

試劑：Hanks液、0．25％胰蛋白酶、含10％小牛血清／胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要也可以是其他種類的培養(yǎng)基)

【實(shí)驗(yàn)步驟】

(1)用胰蛋白酶消化處于對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞置于10ml離心管中，1000r／min離心5min，棄上清。

(2)加入含血清的DMEM培養(yǎng)基，制備單細(xì)胞懸液。

(3)吹打均勻后，對ATCC細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

(4)按2x104～5x104／ml的密度將細(xì)胞接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。

(5)每天用胰蛋白酶對其中3孔細(xì)胞進(jìn)行消化，并進(jìn)行計(jì)數(shù)；

(6)同時平行取3孔用95％酒精固定，吉姆薩或HE染色，選擇細(xì)胞密度適中的區(qū)域觀察分裂相細(xì)胞，至少選擇3個視野，每個視野計(jì)數(shù)1000個細(xì)胞，計(jì)算出每1000個細(xì)胞中的處于分裂相細(xì)胞的平均數(shù)值進(jìn)而得出分裂相所占百分比。

(7)以培養(yǎng)時間作為橫坐標(biāo)，分別以細(xì)胞分裂相百分比(左側(cè))與每孔測得的平均細(xì)胞數(shù)(右側(cè))作為縱坐標(biāo)繪制曲線。

【結(jié)果分析】

將細(xì)胞分裂指數(shù)與細(xì)胞生長曲線融合在一起可以清晰地觀察到ATCC細(xì)胞增殖的趨勢與增殖zui旺盛的時段。