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死活細胞測定及細胞活力測定實驗原理

時間:2017/3/7閱讀:3338
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(1)干細胞細胞膜通透性的差異:活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質選擇性的通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。

(2)死活細胞在代謝上的差異:由于活細胞中新陳代謝的作用,使細胞內具有較強的還原能力,而死細胞或代謝緩慢的老細胞,則因它們的無還原能力或還原能力極弱。

常見的細胞染料有:中性紅(細胞器的專有染料)、臺盼藍、甲基藍、美藍、熒光素雙醋酸酯(FDA)等。

① 中性紅染色:常用染料之一,是細胞器的專有染料。利用干細胞膜的通透性差異,用來染原生動物和顯示動植物組織中活細胞的內含物等。中性紅無毒,常做活體染色的染料。

② 臺盼藍染色:當細胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA 結合,使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以鑒別死細胞與活細胞。嚴格來說,臺盼藍染色檢測的是細胞膜的完整性,通常認為細胞膜喪失完整性,即可認為細胞已經死亡。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍染色的細胞,并可使用細胞計數器進行計數。

③ 美藍染色法:美藍是一種無毒性染料,它的氧化型是藍色的,而還原型是無色的,用它來對活細胞進行染色,由于細胞中新陳代謝的作用,使細胞內具有較強的還原能力,能使美藍從藍色的氧化型變為無色的還原型,所以活細胞無色,而對于死細胞或代謝緩慢的老細胞,則因它們無此還原能力或還原能力極弱,而被美藍染成藍色或淡藍色。因此,用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態,還可以區分死、活細胞.

干細胞甲基藍染色法:甲基藍染色與臺盼藍類似的染色機理。

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