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質粒抽提試劑盒操作注意事項
閱讀:5141 發布時間:2013-8-22哈靈生物的質粒抽提試劑盒的效率以及得率獲得廣大客戶的*!
我們干的研究工作大部分是基因治療,抽提質粒是一件相當痛苦的事。因為需要做動物的體內實驗,您需要靜脈注射50微克
質粒抽提試劑盒的動物,三次重復注射,每次150毫克,如果有60只需要9。如果需要大量抽提質粒的實驗人員就清楚這是需要多大的工作量并且需要提出的是靜脈注射動物用的質粒是需要去內毒素的,目前去內毒素得率高的非哈靈生物莫屬。
要有高產率高質量的質粒抽提試劑盒,以下幾個關鍵點要注意:
1. 準備必要的設備,根據哈靈生物的協議,連接到的廣口瓶,直徑45毫米,這是因為必須與瓶可以匹配,操作的真空過濾這一步可以迅速和容易,減少不必要的麻煩。
2. 高拷貝質粒是的,主管細菌是的高拷貝。作為10大,DH5α稍差。主管細菌是剛做不久。
3. 每次在600毫升細菌數量,LB注意水質量一定要好,一定的pH值在7.27.4,搖床轉速250轉/分,16小時,注意其濃度必須堅強。
4. 操作過程必須與時間的指示一致,嚴格操作。要注意一點:添加中和在的時間較短,因此需要真空,快速進入下一步。
5.洗脫時間很長,要有耐心,不要讓臟兮兮的洗脫液停止。
6.異丙醇沉淀DNA離心在20000轉離心45分鐘,可以提高20%的產量。
7.是圓底離心管和透明,以免離心破裂,而且操作方便。
8.在一定要提前質粒沉淀在棄異丙醇和乙醇一般位置,不誘導質粒被遺棄了。
9.溶解DNA注意溶液的體積比在手冊的說明略小,佳二次溶解,然后混合。
相信注意這些細節后,你將獲得每一次以上1.5mg質粒。