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細菌核糖體（ribosome）分離試劑盒產品說明書

 

主要用途

 

細菌核糖體（ribosome）分離試劑是一種旨在通過化學破膜以及差速超速離心處理方法，分離出完整而純化的70S核糖體組分的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種培養或臨床細菌菌株核糖體成分的分離。產品即到即用，操作簡易，性能穩定，無核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產量皆高。 

 

技術背景

 

核糖體（ribosome）是一種細小顆粒的核糖蛋白復合物（ribonucleoprotein complex），生命細胞制造蛋白質的非膜性結構元素和轉譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質組成，具有多肽轉移酶的活性，刺激RNA合成，并調節RNA、核糖體自身以及蛋白質的生物合成。其分成2個亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過大亞體結合轉運核糖體（tRNA），而小亞體結合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個蛋白組成；而40S由18S RNA和33個蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個蛋白；30S包括16S RNA和21個蛋白。細菌核糖體成為抗菌藥物的靶標，其中50%以上抗菌素針對細菌核糖體。同時核糖體高度進化保留，成為種系分類（phylogenetic classification）的分子標志。   

 

產品內容

 

裂解液（Reagent A）           毫升

保存液（Reagent B）           毫升

產品說明書              1份

 

保存方式

 

保存在－20℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶自備

 

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器

臺式離心機：用于樣品操作

超速離心機：用于樣品操作

超聲儀：用于裂解細胞

渦旋震蕩儀：用于混勻

 

 

實驗步驟

 

實驗開始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進行下列操作。

 

1． 準備50毫升細菌（OD600=0.2或10⁸細胞/毫升）

2． 轉移到50毫升錐形離心管

3． 放進臺式離心機離心30分鐘，速度為3000g

4． 小心抽去上清液

5． 加入預冷的xx毫升裂解液（Reagent A）

6． 渦旋震蕩15秒，充分混勻

7． 超聲處理100瓦功率，20秒一次重復4次

8． 置于冰槽里孵育30分鐘，期間每隔5分鐘渦旋震蕩15秒

9． 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為15000g

10． 小心移取上清液到新的高速離心管

11． 放進超速離心機離心15分鐘，速度為30000g

12． 小心移取上清液到新的高速離心管（注意：可以使用礦物油填滿離心管）

13． 放進4℃超速離心機離心2小時，速度為100000g

14． 小心取出離心管 

15． 小心抽去上清液

16． 加入500微升或xx毫升保存液（Reagent B），混勻顆粒群

17． 轉移到新的1.5毫升離心管

18． （選擇步驟）進行核糖體定量測定 

19． 放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準備后續操作

 

注意事項

 

1． 本產品為20次操作（5 X 10⁹細胞/次）  

2． 建議使用足夠的細菌量

3． 樣品操作均須在4℃或以下狀態下進行

4． 操作時，須無菌操作，避免污染母液

5． 核糖體定量計算公式（微克/微升）： A260 ? 11.1

6． 如果進行核糖體蛋白萃取，建議使用純化核糖體蛋白質萃取試劑盒—HL16041

7． 本公司提供系列核糖體分析技術產品

 

質量標準

 

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定分離的核糖體維持正?；钚?/span>

3． 本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶