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HL30044.4.1 v.A 可溶性包涵體蛋白復性（化學稀釋I）試劑盒產品說明書

主要用途

可溶性包涵體蛋白復性（化學稀釋I）試劑是一種旨在使用化學稀釋方法，使可溶性變性純化蛋白重新折疊，恢復其蛋白功能和活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種可溶性純化蛋白，尤其是細菌內重組蛋白（融合蛋白）以及可溶性處理的包涵體蛋白。可后續用于蛋白功能、酶活性等分析。產品即到即用，性能穩定，參數優化，操作便捷，復性效果理想。

技術背景

在蛋白純化和融化過程中，特別是包涵體蛋白，變性劑（denaturant）提供了有效的手段，其獲得的純化蛋白屬于變性蛋白（denatured protein）。為了使變性蛋白恢復為天然蛋白（native protein），即具有蛋白質的自然結構和活性，需要進行蛋白復性（renaturation）或重新折疊（refolding）。蛋白復性是一個復雜的過程，諸如pH、離子強度、低分子添加劑、氧化還原電位（redox potential）和溫度等物化因子，影響體外蛋白復性的效率。通常體外復性的方法包括稀釋法和緩沖交換法。前者通過化學處理，而后者采用物理方法（例如透析、膜過濾（diafiltration）、凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）等，以達到蛋白復性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜堿（sulfobetaine）、去垢劑、變性劑等將影響化學稀釋復性處理的效率。

產品內容

稀釋液（Reagent A） 10毫升

還原液（Reagent B） 5毫升

平衡液（Reagent C） 5毫升

產品說明書 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里， 避免光照，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

恒溫搖床：用于反應孵育

實驗步驟

方法一：還原復性

1．準備好可溶性純化變性蛋白樣品

2．移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

3．加入適量的稀釋液（Reagent A）調整蛋白濃度到10毫克/毫升

4．移取100微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管

5．加入900微升還原液（Reagent B）

6．放進20℃恒溫搖床孵育4小時，速度為200RPM

7．（選擇步驟）移取10微升進行生物檢測，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結合實驗等確定復性蛋白活性值

8．即刻放進－70℃冰箱里保存

方法二：

平衡復性

1．準備好可溶性純化變性蛋白樣品

2．移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

3．加入適量的稀釋液（Reagent A）調整蛋白濃度到5毫克/毫升

4．移取5微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管

5．加入195微升平衡液（Reagent C）

6．放進28℃恒溫搖床孵育2小時，速度為200RPM

7．（選擇步驟）移取10微升進行生物檢測，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結合實驗等確定復性蛋白活性值

8．即刻放進－70℃冰箱里保存

注意事項

1．本產品為5次操作（還原和平衡各5次）

2．操作時須戴手套

3．本產品的復性效率達15至30％

4．建議與本公司系列包涵體蛋白溶解試劑盒配套使用

5．由于樣品的特異性，用戶可以優化溫度、孵育時間、蛋白濃度，以獲得大復性效率

6．如果復性效率過低，建議使用可溶性包涵體蛋白復性（物理透析）試劑盒－HL30044.5

7．如果獲得滿意的復性效果，用戶可以按比例擴大復性容量

8．本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產品

質量標準

1．本產品經鑒定性能穩定

2．本產品經鑒定無蛋白酶污染