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組織脂質比色法定量檢測試劑盒

產品說明書

 

主要用途

 

組織脂質比色法定量檢測試劑是一種旨在通過脂溶性偶氮染料油紅O特異性地使組織細胞內中性甘油三脂、脂質以及脂蛋白顯示紅色或深紅色，在分光光度儀上進行比色分析，而獲得組織樣本脂質定量信息的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體組織樣本。用于組織成脂細胞定性、組織細胞病理學分析（脂質細胞瘤；LIPOID）等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，著色清晰。

 

技術背景

 

脂類物質（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類（STEROL）物質，例如膽固醇。脂類物質在機體中具有能量儲存的作用，是膜結構的組成成分和細胞信號分子。油紅O（OIL RED O），又稱為27號紅色溶劑（SOLVENT RED 27）、蘇丹紅5B（SUDAN RED 5B），是優于氫醇染料溶劑（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為XX，分子量為XX。染色顯示組織細胞脂類物質呈紅色或深紅色。在分光光度儀或酶標儀上（520nm波長）可以進行定量分析脂質含量。

 

產品內容

 

清理液（Reagent A）    XX毫升

裂解液（Reagent B）  XX毫升

染色液（Reagent C）  XX毫升

溶解液（Reagent D）  XX毫升

產品說明書  1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；試劑具有揮發性，確保瓶蓋密閉；染色液（Reagent C），避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器

1.5毫升離心管：用于樣品處理的容器

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織

微型臺式離心機：用于樣品操作

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度儀：用于定量檢測細胞脂質含量情況

 

 

實驗步驟

 

• 樣品準備

 

• 手術取出動物組織，并秤重以確定50毫克組織重量  
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入XX毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入XX毫升預冷的裂解液（Reagent B）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器
• 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下） 
• 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
• （選擇步驟）移取10微升進行蛋白定量檢測
• 放進冰槽里待測

 

• 測定準備

 

• 準備好待測樣品，置于冰槽里備用
• 設定好分光光度儀：520nm波長，并置零

 

• 背景對照

 

• 移取XX微升裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管
• 加入XX微升染色液（Reagent C）
• 室溫下孵育15分鐘，避免光照
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液
• 加入XX毫升裂解液（Reagent B）
• 輕度渦旋震蕩
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液
• 重復實驗步驟6至9二次
• 加入XX毫升溶解液（Reagent D）
• 輕度渦旋震蕩，混勻
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照
• 轉移到比色皿
• 即刻放進分光光度儀（520 nm波長）：獲得背景對照吸光讀數（OD）

 

• 樣品測讀

 

• 移取100微升上述制備的待測樣品到新的1.5毫升離心管
• 加入XX微升染色液（Reagent C）
• 室溫下孵育15分鐘，避免光照
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液
• 加入XX毫升裂解液（Reagent B）
• 輕度渦旋震蕩，混勻顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液
• 重復實驗步驟6至9二次
• 加入XX毫升溶解液（Reagent D）
• 輕度渦旋震蕩，混勻顆粒群
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照
• 轉移到比色皿
• 即刻放進分光光度儀（520 nm波長）：獲得待測樣品吸光讀數（OD）
• 實際吸光讀數（OD）：待測樣品吸光讀數—背景對照吸光讀數
• 構建組織樣品脂質定量曲線：橫座標（x軸）為組織蛋白含量、組織重量、時間點或藥物處理濃度等；縱坐標（y軸）為實際樣品吸光讀數（OD）

  

注意事項

 

• 本產品為20次操作
• 操作時須戴手套
• 試劑具有揮發性，務必密封保存
• 染色液（Reagent C）避免－20℃低溫保存，否則出現沉淀
• 如果染色液（Reagent C）出現沉淀，須過濾后再使用
• 染色時，避免光照
• 如果沒有520nm波長的濾波器，可以使用490nm波長替代
• 本公司提供系列脂質檢測試劑產品

 

質量標準

 

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感