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過氧化物酶（pod）測試方法
閱讀：2362 發布時間：2016-10-26過氧化物酶（pod）測試原理：
過氧化物酶催化過氧化氫氧化酚類的反響，產品為醌類化合物，此化合物進一步縮合或與別的分子
縮合，發生顏色較深的化合物。本試驗以鄰甲氧基苯酚（即愈創木酚）為過氧化物酶的底物，在此
酶存鄙人，H2O2可將鄰甲氧基苯酚氧化成紅棕色的4-鄰甲氧基苯酚紅棕色的物質可用分光光度計在470nm處測定其消光值，即可求出該酶的活性。
試驗準備：
儀器：分光光度計、離心機、秒表、天平、研缽、磁力攪拌器
試劑：愈創木酚、30%H2O2、0.2mol/L磷酸緩沖液（7.8）、0.1mol/L磷酸緩沖溶液（PH6.0，見附錄）
反應混合液[100mmol/L磷酸緩沖溶液（PH6.0）50ml，參加愈創木酚28μl，于磁力攪拌器上加熱攪
拌，直至愈創木酚溶解、待溶液冷卻后，參加（待溶液冷卻后再參加，不然導致分解）30%H2O2
19μl，混合均勻，保留于冰箱中。
實踐的構成和裝備：
試劑一：液體60ml×4瓶，4℃保留6個月
試劑二：粉劑×3瓶，4℃保留6個月
試劑二使用液的裝備：臨用每瓶粉劑參加10ml的雙蒸水溶解，4℃避光保留
試劑三：液體5ml1瓶，4℃保留6個月
試劑三使用液的制造：臨用前用雙蒸水15倍稀釋，使得1cm光徑，雙蒸水調零時A240保持在0.4擺布，現用現配。若A值太高，則加雙蒸水稀釋，若A值太低，則參加適量試劑三。（通常在25倍擺布稀釋）
試劑四：液體50ml×2瓶，4℃保留6個月。
說明書：
(1)檢查的成果沒有吸光度值或吸光度值很低
也許導致的原因有試劑盒已過有效期、運用的試劑盒內容物不是同一個批次的、沒參加 酶符號物、試劑盒的內容物沒有充沛的回溫、孵育的溫度太低一級，相對應的解 決辦法是替換 成在有效期以內的試劑 盒、運用 同～個批次的試劑盒的內容物、依照試劑盒闡明書中的過程進行操作、將試劑盒的內容物充沛的回溫后再進行操作、在試驗操作的全部過程中請仔細觀察恒溫箱的溫度。
(2)規范曲線的線性 欠好，或 平行性欠好(雙孔對照孔的OD值 不一樣很大)，或呈現跳孔的景象
也許導致的原因有酶標板孔間彼此污染、洗板后未能趕快進行下一 步操作、增加樣品或其 它試劑時操作的辦法不對、孵育方位避光性欠安或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發、酶標板孔問參加的試劑量不一樣，相 對應的解決辦法是加樣時請當心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請當心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、增加試劑時請懸空滴入，牢記勿將槍頭接觸到板 孔內，汲取不一樣試劑瓶中的液體時就要替換一次槍頭 、 承認孵育環境不透光，蓋板膜將酶標板 密封好、運用已校正過的微量加樣器，如將次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將 今后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性 。
(3)吸光度值偏
高也許導致的原因有孵育的溫度過高、反應 的時刻過長。相對應的解決辦法是調整孵育環境的溫度，如無法調整 室內的溫度，請將顯色時刻適當的縮短、操控反應時刻。
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(4)陰性樣本的吸光度值低
于陽性吸光度值也許導致的原因是呈現跳孔的景象或酶標板孔中的試劑未充沛的混合。解 決的辦法是留意操作的辦法，留意洗滌時的辦法、加 完試劑后可將酶標板在桌子上平行悄悄晃動30s，混勻液體 。