化工儀器網
技術文章
PCR 擴增產物出現多條帶（雜帶）原因與解決方法
閱讀：29953 發布時間：2021-10-8擴增產物出現多條帶(雜帶)
1) 引物用量偏大，引物的特異性不高。
應調換引物或降低引物的使用量。
2) 循環的次數過多。
適當增加模板的量，減少循環次數。
3) 酶的用量偏高或酶的質量不好。
應降低酶量或調換另一來源的酶。
4) 退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。
應提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴增。以2度為梯度設計梯度PCR反應優化退火溫度。
5) 樣品處理不當。
6) Mg2+濃度偏高。
因適當調整Mg2+使用濃度。
7) 若為PCR試劑盒。
也可能時試劑盒本身質量有問題。
8) 復制提前終止。
使用非熱啟動的聚合酶時常有發生。冰上準備反應體系或采用熱啟動聚合酶。
9) 反應緩沖液未*融化或未充分混勻。
確保反應緩沖液融化*并*混勻。
10) 引物特異性差。
利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。
11) 引物量過多。
減少反應體系中引物的用量。
12) 模板量過多。
質粒DNA的用量應<50ng，而基因組DNA則應<200ng。
13) 外源DNA污染。
確保操作的潔凈。