貝克曼庫爾特超速流式細胞分選系統有哪些應用
MoFlo XDP超速流式細胞分選系統可對復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時對其中一種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等,可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%,保證樣本中目標細胞的高回收率,特別適用于干細胞等極低含量的細胞研究。
MoFlo XDP可運對各種真核和原核細胞、植物細胞、微生物、浮游生物等進行檢測及分選。專為要求高產量、生物安全性和需要便捷的軟件分析系統的研究者而設計。
一.稀有細胞應用
標記CFSE后通過尾靜脈移植入受者小鼠體內,提取受者小鼠脾臟細胞進行移植細胞檢測。總共檢測2293萬個細胞,發現移植細胞已經進行6代增殖。R7,R8,R9分別為第5,第4,第3代移植細胞,含量分別在萬分之一左右。含量約為1/10萬的CD133陽性細胞,分選后直接注射裸鼠皮下進行成瘤實驗。
二、低含量,連續表達細胞同時進行高速四路分選
三、腫瘤干細胞檢測
腫瘤干細胞通常缺乏特異性標記,含量又很低,所以很難被檢測到。腫瘤干細胞和普通腫瘤細胞相比,細胞膜含有有泵動功能的ABC等蛋白家族,是腫瘤耐藥和復發的決定性因素,因此對腫瘤干細胞的研究具有重要意義。
利用其細胞膜的泵動功能,以小分子活性染料Hoechst33342對腫瘤樣本進行平衡染色,可以檢測到因為泵出Hoechst33342而著色較少的側群細胞(SP,Side Population),此即為腫瘤干細胞。利用泵蛋白抑制劑Verapami同時染色,可以看到側群細胞比例明顯減少或全部消失,能確認SP細胞的位置。其它干細胞,如間充質干細胞、造血干細胞、神經干細胞、各種成體干細胞等都可以用這種方法來進行篩選。分選出SP細胞群和非SP細胞群,可以研究基因和蛋白表達差異、致病機理、藥物篩選等生命科學的重大課題。
四、染色體/精子分析分選
MoFlo/ MoFlo XDP高精度信號分辨能力(液流穩定、激光/電子系統/PMT噪音低/運算速度快)和高活性收獲細胞(系統清潔度好)的功能在染色體和精子分選中得到的表現。對牛精子分選進行人工授精生產小奶牛在畜牧業上有很大的經濟效益,MoFlo/ MoFlo XDP是可以進行這個應用的分選流式細胞儀,在國內有30臺MoFlo在日夜運轉進行商業分選。
不同染色體之間的DNA含量差異很小,普通的DNA染料無法區分23對染色體。利用高功率355nm紫外激光激發的HOECHST 33258和高功率458nm激光激發的CA3分別對染色體的DNA進行染色。不同的染色體因其G-C/A-T堿基對的比例不同而被分離開,選中任何一條染色體設門后即可進行高純度分選。染色體分析分選可以應用在高精度FISH、染色體移位、基因定位、染色體序列測定、染色體相關蛋白分析等。
MoFlo XDP可運對各種真核和原核細胞、植物細胞、微生物、浮游生物等進行檢測及分選。專為要求高產量、生物安全性和需要便捷的軟件分析系統的研究者而設計。
一.稀有細胞應用
標記CFSE后通過尾靜脈移植入受者小鼠體內,提取受者小鼠脾臟細胞進行移植細胞檢測。總共檢測2293萬個細胞,發現移植細胞已經進行6代增殖。R7,R8,R9分別為第5,第4,第3代移植細胞,含量分別在萬分之一左右。含量約為1/10萬的CD133陽性細胞,分選后直接注射裸鼠皮下進行成瘤實驗。
二、低含量,連續表達細胞同時進行高速四路分選
三、腫瘤干細胞檢測
腫瘤干細胞通常缺乏特異性標記,含量又很低,所以很難被檢測到。腫瘤干細胞和普通腫瘤細胞相比,細胞膜含有有泵動功能的ABC等蛋白家族,是腫瘤耐藥和復發的決定性因素,因此對腫瘤干細胞的研究具有重要意義。
利用其細胞膜的泵動功能,以小分子活性染料Hoechst33342對腫瘤樣本進行平衡染色,可以檢測到因為泵出Hoechst33342而著色較少的側群細胞(SP,Side Population),此即為腫瘤干細胞。利用泵蛋白抑制劑Verapami同時染色,可以看到側群細胞比例明顯減少或全部消失,能確認SP細胞的位置。其它干細胞,如間充質干細胞、造血干細胞、神經干細胞、各種成體干細胞等都可以用這種方法來進行篩選。分選出SP細胞群和非SP細胞群,可以研究基因和蛋白表達差異、致病機理、藥物篩選等生命科學的重大課題。
四、染色體/精子分析分選
MoFlo/ MoFlo XDP高精度信號分辨能力(液流穩定、激光/電子系統/PMT噪音低/運算速度快)和高活性收獲細胞(系統清潔度好)的功能在染色體和精子分選中得到的表現。對牛精子分選進行人工授精生產小奶牛在畜牧業上有很大的經濟效益,MoFlo/ MoFlo XDP是可以進行這個應用的分選流式細胞儀,在國內有30臺MoFlo在日夜運轉進行商業分選。
不同染色體之間的DNA含量差異很小,普通的DNA染料無法區分23對染色體。利用高功率355nm紫外激光激發的HOECHST 33258和高功率458nm激光激發的CA3分別對染色體的DNA進行染色。不同的染色體因其G-C/A-T堿基對的比例不同而被分離開,選中任何一條染色體設門后即可進行高純度分選。染色體分析分選可以應用在高精度FISH、染色體移位、基因定位、染色體序列測定、染色體相關蛋白分析等。