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當前位置:上海美譜達儀器有限公司>>技術(shù)文章>>紫外分光光度法的四種測定方法
測定時,除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照,采用1cm的石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度,或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規(guī)定外,吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi),并以吸光度最大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù),以在0.3~0.7之間為宜。儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半寬度的十分之一,否則測得的吸光度會偏低;狹縫寬度的選擇,應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增大為準,由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù),或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量。
當溶液的pH值對測定結(jié)果有影響時,應(yīng)將供試品溶液的pH值和對照品溶液的pH值調(diào)成一致。
含量測定一般有以下幾種方法:
(1)對照品比較法
按各品種項下的方法,分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100%±10%,所用溶劑也應(yīng)*一致,在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后,按下式計算供試品中被測溶液的濃度∶
cx=(Ax/Ar)cr
式中 cx為供試品溶液的濃度;
Ax為供試品溶液的吸光度;
cr為對照品溶液的濃度;
Ar為對照品溶液的吸光度。
(2)吸收系數(shù)法
按各品種項下的方法配制供試品溶液,在規(guī)定的波長處測定其吸光度,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時,吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100,并注意儀器的校正和檢定。
(3)計算分光光度法
計算分光光度法有多種,使用時應(yīng)按各品種項下規(guī)定的方法進行。當吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時,波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響,故對照品和供試品的測試條件應(yīng)盡可能一致。計算分光光度法一般不宜用作含量測定。
(4)比色法
供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強吸收,或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度,可加入適當?shù)娘@色劑,使反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收移至可見光區(qū),這種測定方法稱為比色法。
用比色法測定時,應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液,用溶劑補充至同一體積,顯色后,以相應(yīng)試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長處測定各份溶液的吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標繪制標準曲線,再根據(jù)供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應(yīng)的濃度,并求出其含量。也可取對照品溶液與供試品溶液同時操作,顯色后,以相應(yīng)的試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度,按上述(1)法計算供試品溶液的濃度。
除另有規(guī)定外,比色法所用空白系指用同體積溶劑代替對照品或供試品溶液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理制得。
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