P0819 Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 常備現貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 P0819
- 產地 北京
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2025/3/17 11:25:24
- 訪問次數 9
聯系方式:宋慧萌13269198101 查看聯系方式
聯系我們時請說明是化工儀器網上看到的信息,謝謝!
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 30T |
---|---|---|---|
貨號 | P0819 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,制藥 |
主要用途 | 適用于分離大分子蛋白 |
諾博萊德 Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒
Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 常備現貨
產品簡介:
聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠及 SDS-聚丙烯酰胺凝膠;非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,并依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開,主要用于分離蛋白質和寡核苷酸。常規 SDS-PAGE凝膠電泳適用于分離大分子蛋白,對于小分子量的蛋白或多肽,分辨率大大降低。
NobleRyder Tricine-SDS-PAGE 電泳能夠較好的分離 10KD 以下的蛋白或多肽,是電泳法分離多肽的主要方法,30T 一般可以配制 30~35 塊膠,具體配制的量應根據器具大小決定。電泳分離后可直接考馬斯亮藍染色、銀染等。
產品組成:
編號 名稱 | P0819 30T | Storage |
試劑(A): 49.5%T 3%C | 2ml | 4℃ |
試劑(B): 49.5%T 6%C | 60ml | 4℃ |
試劑(C): Gel buffer | 90ml | 4℃ |
試劑(D): Glycerol | 20ml | RT |
試劑(E): Ammonium Persulfate | 0.3g | RT |
試劑(F): TEMED | 2×1ml | 4℃ 避光 |
使用說明書 | 1 份 |
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
操作步驟(僅供參考):
1、 配制 10%過硫酸銨(APS):直接在 0.3g Ammonium Persulfate 中加入 3ml 蒸餾水,充分溶解,分裝成小份儲存于-20℃或 4℃。注意:一般用 1.5mlEP 管分裝成 0.5-1ml每支,-20℃保存,每支使用 2-3 次即棄用。短期使用時,可保存于 4℃,1 周有效。
2、 根據目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度,按照附表配制分離膠:
① 將不同體積的蒸餾水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加入到離心管中充分混合。
② 加入 10%APS 和 TEMED,立即渦旋混勻 5~10s,以使溶液充分混勻。
③ 在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1mm mini-gel,分離膠溶液加約 4ml),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1~3cm 的水層,使凝膠表面保持平整。
④ 靜置,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
3、 根據目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度,按照附表配制夾層膠:
① 去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。
② 將不同體積的蒸餾水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到離心管中混合。
③ 加入 10%APS 和 TEMED,立即渦旋混勻 5~10s,以使溶液充分混勻。
④ 將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于 1mm 的 mini-gel,夾層膠溶液加約1ml),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層 1~2cm 的水層,使凝膠表面保持平整。
⑤ 靜置,待夾層膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
4、 根據目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度,按照附表配制濃縮膠:
① 去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。
② 將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到離心管中混合。
③ 加入 10%APS 和 TEMED,立即渦旋混勻 5~10s,以使溶液充分混勻。
④ 將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。
⑤ 靜置,待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,避免破壞加樣孔。進行電泳操作。
5、 電泳
將電泳槽置于 4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液,內槽加入陰極緩沖液,30V 預電泳10 min,將處理好的樣品加入點樣孔, 30V 電泳 1h, 100V 電泳至溴酚藍到達膠底部后停止電泳,進行后續的考馬斯亮藍染色或電轉。
附表 Tricine-SDS-PAGE 凝膠配方表
成分 | 分離膠 | 夾層膠 | 濃縮膠 | ||
濃度/體積 | 20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 10%/2ml |
49.5%T 3%C | - | - | - | 0.407ml | 0.16ml |
49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.5ml | 1.395ml | - | - |
Gel buffer | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml | 0.667ml | 0.667ml |
Glycerol | 0.48ml | 0.48ml | 0.48ml | - | - |
蒸餾水 | 0.7ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
10%APS | 40μl | 40μl | 40μl | 20μl | 20μl |
TEMED | 5μl | 5μl | 5μl | 3μl | 3μl |
注意事項:
1、 過硫酸銨配制成 10%APS 溶液后應當-20℃保存,用 2~3 次,亦可 4℃保存幾天。
2、 TEMED 易揮發,使用后請蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關系密切。可通過適當調節 TEMED 的用量,控制在不同的室內環境下凝膠凝聚的速度。
3、 配制聚丙烯凝膠的過程中,如果室溫較低,可以置于 37℃放置,加速凝固。在液體混勻的時候應盡量避免氣泡的產生。
4、 在分離膠上層加蒸餾水時要緩慢,速度不宜過快。
5、 49.5%T 3%C 和 49.5%T 6%C 為不同比例的 Acr-Bis,有輕微神經毒性,請小心操作。
有效期:24 個月有效。
Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 常備現貨
產品訂購信息:
P0819 Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 30T