細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

NobleRyder  EX9388 細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：EX9388

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T / 100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder  EX9388 細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒產(chǎn)品介紹：

細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細(xì)胞樣本中提取膜蛋白，提取的膜蛋白純度高，不含核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便。制備的膜蛋白保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，需要除鹽后再用于2D電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。本試劑盒提取的膜蛋白為細(xì)胞的總膜蛋白，需要單獨(dú)的細(xì)胞器膜蛋白提取，請(qǐng)選用其他貨號(hào)的試劑盒。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、勻漿機(jī)/勻漿器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞、組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、提取過程簡單方便。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種 獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于 低溫。

3、蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4、可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5、Western Blot 實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用Na-K ATPase。

6、提取液A 在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

7、膜蛋白電泳時(shí)loading buffer 應(yīng)該避免煮沸。

8、膜蛋白電泳時(shí)可以提高loading buffer 的SDS含量。

二、操作步驟

1. 提取液制備：

 每200 μl 蛋白提取液A 中分別加入2 μl 蛋白提取液B 和2 μl 蛋白酶抑制劑混合物， 混勻后置冰上備用。

【注】：

l  根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

l  加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

l  提取液A 在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

l  以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取5-10×10 6個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

【注】：

l  細(xì)胞數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整。由于膜蛋白含量較少，需要較多的細(xì)胞才能保證得率。

l  在條件允許的情況下，盡可能加大細(xì)胞上樣量。

3. 用冷PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 在細(xì)胞沉淀中加入200-400μl冷的提取液A，高速渦旋振蕩5秒，置2-8℃條件振蕩30分鐘-1 小時(shí)。

【注】：

l  必須2-8℃低溫振蕩。

l  用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體能輕微晃動(dòng)即可。

l  沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，置2-8℃靜置，稍微延長處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

l  提取液A 處理后細(xì)胞沉淀應(yīng)明顯減少，否則延長處理時(shí)間。

5. 然后在4℃，12000×g 條件下離心5 分鐘，收集上清，棄沉淀。

6. 將上清吸入另一干凈離心管，置 37℃水浴 10 分鐘。然后在 37℃，500×g力離心2分鐘。

【注】：

l  必須37℃水浴和離心。

l  沒有37℃離心條件可以不離心，延長水浴時(shí)間至液體澄清分層明顯即可。

7. 此時(shí)溶液分為兩層，小心移除上層，留下管底部下層大約20-50 μl 液體。

【注】：

l  下層為粘稠狀液體。

8. 用30-100 μl 膜蛋白溶解液C 溶解該液體，即得膜蛋白樣品。

【注】：

l  膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于4℃ 冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹 打混勻即可。

l  于4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

l  建議用BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

l  蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

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