諾博萊德 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

NobleRyder P4995 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

產品貨號：P4995

產品名稱：革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P4995 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

革蘭氏陽性菌總蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陽性菌菌體中提取總蛋白，試劑盒適用各種革蘭氏陽性菌以及各種厚壁菌體的蛋白提取，也可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過程簡單方便。本試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，可以用于不同的下游應用。根據不同的菌液樣本以及不同的培養狀況，每毫升菌液大概可以提得2-10mg蛋白。采用BCA或Lowry法進行蛋白定量。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

適用樣本：革蘭氏陽性菌

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

革蘭氏陽性菌總蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陽性菌菌體中提取總蛋白，試劑盒適用各種革蘭氏陽性菌以及各種厚壁菌體的蛋白提取，也可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過程簡單方便。

本試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，可以用于不同的下游應用。根據不同的菌液樣本以及不同的培養狀況，每毫升菌液大概可以提得 2-10mg 蛋白。采用 BCA 或Lowry 法進行蛋白定量。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，需要除鹽后再用于 2D 電泳。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、使用方便，不需昂貴設備。

2、可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、將蛋白提取的時間縮短至 1 小時。

4、采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

6、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

7、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

8、本試劑盒中不有 EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 預實驗很重要。必須要做預實驗，在正式實驗之前取少量樣本優化實驗條件，并像正式樣本一樣認真進行，看實驗結果是否可行，實驗條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實驗條件通常差異較大，同種細胞的不同模型下需要的實驗條件也可能不同，為了避免浪費正式樣本和試劑，一定要提前預實驗優化實驗條件。

2. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. 本試劑盒中提取液和蛋白酶抑制劑中均不含 EDTA，根據需要可自行加入。

二、革蘭氏陽性菌蛋白提取：

1. 提取液的準備：

根據所需要提取的樣本量，每 500 μl 提取液 A 中加入 2 μl 蛋白酶抑制劑和 5 μl 蛋白穩定液，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 在 4℃，10000×g 條件下將菌液離心 5 分鐘，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

3. 用 PBS 洗菌體 2 次。若為冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。

4. 按每 100 mg 濕重菌體樣本加入 500 μl 蛋白提取液，吹打混勻，冰上放置 20-30 分鐘。

【注】：

1) 細胞數量根據實驗情況調整，每次的裂解液用量并不是一定的，請根據實際情況調整。

2) 加入菌體體積的 3-5 倍體積的提取液，充分淹沒菌體即可。

5. 在 150-300 w，10 s 超聲/10 s 間隔條件下冰浴超聲至菌液變澄清。

【注】：

1) 若無超聲條件，可不超聲，將提取液 A 置研缽研磨。若無研磨條件可以不研磨。

2) 若無超聲，將提取液在室溫或 37℃持續振蕩 1-2 小時。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

4) 如果沒有振蕩條件，可以在室溫或 37℃靜置，稍微延長提取液處理時間，中間每隔 10分鐘渦旋振蕩混勻。

5) 超聲時間盡量短，提取液變清即可，一般不超過 20 分鐘。

6) 如果超聲時出現黑色沉淀，說明超聲功率過大，需要降低功率。

7) 避免產生泡沫。

6. 在 4℃，12000×g 條件下將提取液離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清移入另一干凈離心管，即得革蘭氏陽性菌蛋白樣品。

8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱備用或直接用于下游實驗。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

產品訂購信息：

P4995  革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒  50T/100T