分子實驗-PCR
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- 公司名稱 伊萊博生物科技(上海)有限公司
- 品牌 其他品牌
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- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2024/7/31 10:07:51
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分子實驗-PCR
分子實驗-PCR實驗的原理是DNA分子在電場中會向正極方向移動。不同長度的DNA由于受到凝膠介質(zhì)的阻力不同,表現(xiàn)為不同的遷移率而被分開。
1.試劑
PCR產(chǎn)物,TAE電泳緩沖液,1000x溴化乙錠儲存液,電泳級瓊脂糖,DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)
2.實驗準(zhǔn)備
配制TAE電泳緩沖液(50x儲存液,pH約8.5: Tris 堿242g 57.1ml冰已酸,37.2g Na2EDTA.2H2O,dd water定容至lL),6x加樣緩沖液(0.25%溴酚藍(lán),40%蔗糖水溶液) ; 1.5ml 離心管裝入鋁制飯|盒(滅菌)、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒(滅菌)。
3.操作步驟
(1)稱取0.4g瓊脂糖粉,放入三角瓶,加入50ml TAE電泳緩沖液(1x),放入微波爐中燒開( lmin)。注意觀察燒瓶中的瓊脂糖粉末,待*熔化后停止微波爐(切不可讓膠溶液溢出到微波爐中! )。
(2)戴上線手套,從微波爐中取出三角瓶,置桌面上冷卻致不燙手(約50-60°C)。
(3)把梳子插到凝膠灌制模具的正確位置后緩緩倒入膠溶液。膠溶液倒至與模具的矮邊緣相平即可,不要把膠溶液溢到外面。在桌面上靜置10-20分鐘待膠*凝固。(剩 下的膠溶液封口后留待以后再熔化使用)。
(4)在水平電泳槽中加滿1xTAE電泳緩沖液。根據(jù)電泳槽的長度把電泳儀的電壓調(diào)至170V(10V/cm),注意正負(fù)電極的位置連接正確。
(5)待膠*凝固后( 15-20分鐘),小心拔出梳子。用手指捏住模具兩側(cè)的高邊緣取出模具和凝膠放入電泳槽中間的平臺上,凝膠要沒入電泳液中。凝膠上有樣品孔的側(cè)要朝向電泳槽的負(fù)極。
(6)在凝膠上選擇相鄰的加樣孔。用10μl 的吸液頭分別將管中的樣品加入凝膠的加樣孔中(如果需要時,在相鄰的加樣孔中加入1.5-3ul DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)物)。
加樣時持移液器的手以肘部固定在桌上,用另一只手扶住這只手的手腕,以減少移液器的抖動。看到藍(lán)色的樣品吸管尖頭伸進(jìn)加樣孔后(不能伸得太深,以免穿破凝膠的底部)緩緩將藍(lán)色的樣品壓入加樣孔中。切不可使藍(lán)色樣品流到孔外。
(7)打開電源開關(guān),樣品將形成條藍(lán)色的橫帶 向前移動 (如果發(fā)現(xiàn)藍(lán)色向后移動,立即關(guān)閉電源,調(diào)換電極)。電泳將進(jìn)行約30min。
(8)當(dāng)藍(lán)色的溴酚藍(lán)遷移到距凝膠邊緣1cm時,關(guān)閉電源。取出模具和凝膠。放入凝膠成像系統(tǒng)中拍照。