蛋白質純化實驗技術服務

蛋白質純化簡介:

蛋白純化要利用不同蛋白間內在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質的污染，而利用各蛋白質的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。

蛋白質純化的實驗方法:

蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個階段。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如DNA、RNA等分開，由于此時樣本體積大.成分雜，要求所用的樹脂高容量、高流速、顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開，必要時可加入相應的保護劑(例如蛋白酶抑制劑)。防止目的蛋白被降解。精細純化階段則需要更高的分辨率，此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質接近的蛋白區分開來，要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率，常用離子交換柱和疏水柱，應用時要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個因素。選擇性指樹脂與目的蛋白結

合的特異性，柱效則是指各蛋白成分逐個從樹脂上集中洗脫的能力，洗脫峰越窄，柱效越好。僅有好的選擇性，洗脫峰太寬，蛋白照樣不能有效分離。

蛋白的表達:

是指通過模式生物來表達目的的外源基因蛋白的一種現代分子生物學技術，表達系統主要是由宿主、外源基因、載體和輔助

成分組成，從而實現外源基因通過載體在宿主中的表達。

實驗意義:

1.蛋白表達技術在基因工程技術中占有核心地位，在實際生產中具有重要的應用意義。

2.蛋白表達技術已經廣泛應用于生物學各個具體領域,特別是體內的功能研究和蛋白質的大規模生產都需要應用。

實驗原理:

1.獲得目的基因;

2.構建合適的載體(注意根據目的基因和純化方式的選擇等多方面因素選擇融合標簽) ;

3.將目的基因插入表達載體中。并通過測序進行驗證；

4.載體轉化進入大腸桿菌等宿主菌后，測序篩選挑單克隆菌落進行擴大培養，IPTG誘導靶蛋白的表達；

5.破碎菌體后提取蛋白。并通過融合標簽純化得到靶蛋白。

分類:

1.真核表達系統:真核表達系統主要有昆蟲表達系統、酵母表達系統和哺乳動物細胞表達，其中酵母表達和哺乳動物細胞較為常見。

2.無細胞體外表達系統，又稱為體外翻譯系統，通過模擬細胞的生命活動和現象來重現胞內蛋白的轉錄和翻譯過程。

結果展示:

原核表達系統

真核表達系統

無細胞體外表達系統

Reaction temperature (C)

實驗周期及交付標準:

1.實驗周期: 4-6周

2.交付標準:目的蛋白、實驗報告(試劑、 耗材、實驗步驟)、原始數據等。

需確認的信息:

1.表達系統采取方式。

2.純化步驟選擇。