Peprotech  300-02重組人-干擾素IFN-γ

Peprotech  300-02重組人IFN-γ

產品規格：100μG

產品描述：

Peprotech 重組人-干擾素IFN-γ是由CD4和CD8T淋巴細胞以及活化的NK細胞產生的酸不穩定干擾素。IFN-γ受體存在于大多數免疫細胞中，其通過增加I類MHC蛋白的表面表達來響應IFN-γ信號傳導。這促進了抗原呈遞給T輔助細胞（CD4 +）。抗原呈遞細胞中的IFN-γ信號傳導和識別抗原的B和T淋巴細胞調節免疫應答的抗原特異性階段。另外，IFN-γ刺激許多淋巴細胞功能，包括巨噬細胞，NK細胞和嗜中性粒細胞的抗微生物和抗腫瘤反應。人IFN-γ是物種特異性的，僅在人和靈長類動物細胞中具有生物活性。重組人IFN-γ是含有144個氨基酸殘基的16.8kDa蛋白質。

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PeproTech細胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正常現象）。

產品來源：大腸桿菌

CIK 培養用細胞因子和抗體：

IFN-γ (干擾素-γ)

IFN-γ 具有上調外周血淋巴細胞表面IL-2R表達的作用，因此會增強T細胞對IL-2促

增殖反應的敏感度和強度。在誘導CIK細胞形成的過程中加入IFN- γ ，可降低IL-2的用量。

研究發現，IFN-γ加入的順序與CIK的細胞毒活性密切相關。先加入IFN- γ，培養24后再

加入IL-2，可明顯提高CIK的細胞毒活性。

CIK 是“Cytokine-Induced Killer Cells"的縮寫，中文全稱為“細胞因子誘導的殺傷細胞"。

CIK 是單個核細胞在CD3 單抗和多種細胞因子(包括IFN-γ, IL-2 等)的作用下培養獲得的一

群以CD3+CD56+細胞為主要效應細胞的異質細胞群， 其既具有T 淋巴細胞強大的抗腫瘤活

性，又具有NK 細胞(自然殺傷細胞)的非MHC(主要組織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。

CIK 細胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣，對正常組織毒性低，體外可高度擴增等特點，是目前

臨床上廣泛使用的過繼性免疫-治療細胞。

Peprotech  300-02重組人-干擾素IFN-γ

AA序列：MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ

純度：通過SDS-PAGE凝膠和HPLC分析≥98％。

生物活性：該ED?50通過使用HT-29細胞細胞毒性分析來確定是≤0.05納克/毫升，相當于≥2×10的比活性7單位/ mg。

交叉反應性：

細菌，魚+病毒，人類，人類+細菌，人類+倉鼠，人類+小鼠，人類+病毒，Mandarin魚，猴子，小鼠，N / A，豬，兔子，大鼠

可用于研究艾滋病，免疫系統 干細胞和分化

【細胞制備】

1． 外周血單個核細胞的采集

1.1 用血細胞分離機采集患者自身的外周血單個核細胞50-100mL；

1.2 淋巴細胞分離液密度梯度離心法進一步純化單個核細胞(PBMC)；

1.3 無血清培養液洗滌2 次，獲得純度在90%以上的PBMC。

2． CIK 細胞的培養及鑒定

2.1 將PBMC 按1-2 x 106/ml 的濃度懸浮于無血清培養液中，加入1,000 U/ml 的重組

人IFN-γ，37oC，5%CO2 培養箱中培養；

2.2 24h 后加入50ng/ml 的CD3 單克隆抗體和300 U/ml 的重組人IL-2，刺激CIK 細

胞的生長和增殖；

注：此時也可同時加入100 U/ml 的重組人IL-1α。

2.3 每3 天半量換液或擴瓶一次，并補加重組人IL-2 300 U/ml；

2.4 在培養的第14d，收獲CIK 細胞。

2.5 CIK 細胞質控：

2.9.1 臺盼藍染色檢測：活細胞應在80%以上；

2.9.2 流式細胞儀檢測細胞表面CD3、CD8、CD56 等分子的表達：CD3+CD56+細

胞的比例應在20%以上。

2.9.3 細胞殺傷實驗：以CIK 細胞為效應細胞，以腫瘤細胞(可為原代腫瘤細胞或

腫瘤細胞株)為靶細胞，將效應細胞與靶細胞按10 : 1(數目比) 的比例加入

96 孔U 型板中，每孔含靶細胞1 x 104 個，終體積為200 μl，設3 個復孔。

培養4h，然后取培養上清，用乳酸脫氫酶(LDH) 試劑盒檢測效應細胞對靶

細胞的殺傷率。

2.9.4 收獲細胞前，取少量培養物進行細菌、真菌培養，并檢測支原體、衣原體，

及內毒素(標準：病原學檢測陰性，內毒素<5 Eu)。

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